（1 ）从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。
（2） 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。
（3 ）按下表在各管中加入各种试剂。
0μg | 2.5μg | 5.0μg | 10.0μg | 20.0μg | 40.0μg | |
1mg/ml BSA | － | 2.5μl | 5.0μl | 10.0μl | 20.0μl | 40.0μl |
0.15mol/L NaCl | 100μl | 97.5μl | 95.0μl | 90.0μl | 80.0μl | 60.0μl |
G250考马斯亮蓝溶液 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
（4）混匀后，室温放置2min。在生物分光光度计（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。
2、检测样品蛋白含量
（1）取足量的1.5ml离心管，每管加入4℃储存的考马斯亮蓝溶液1ml。室温放置30min后即可用于测蛋白。
（2 ）取一管考马斯亮蓝加0.15mol/L NaCl溶液100ul，混匀放置2分钟可做为空白样品，将空白倒入比色杯中在做好标准曲线的程序下按blank测空白样品。
（3 ）弃空白样品，用无水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5mL），再用无菌水洗一次。
（4） 取一管考马斯亮蓝加95ul 0.15mol/L NaCl溶液和5ul待测蛋白样品，混匀后静置2min，倒入扣干的比色杯中按sample键测样品。
注意：每测一个样品都要将比色杯用无水乙醇洗2次，无菌水洗一次。可同时混合好多个样品再一起测，这样对测定大量的蛋白样品可节省很多时间。测得的结果是5ul样品含的蛋白量。