蛋白质含量的测定实验

FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25～250 μg/ ml 蛋白质浓度。

蛋白质

碳酸钠 氢氧化钠 硫酸铜 酒石酸钠 钨酸钠 钼酸钠 蒸馏水 磷酸 浓盐酸 硫酸锂 液体溴 酚酞

722S 型分光光度计 电子天平 离心机 容量瓶 试管 吸管

1.  样品的制备
用台秤称取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾钵碾成匀浆, 加水30 ml , 继续碾10 min , 倒入离心管中, 另加5 ml水将剩余物洗进离心管, 平衡后于1000 r/ min 离心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待测。

2.  标准曲线的制作与样品测定

按下表操作，A . FOLIN 酚法    B . 考马斯亮蓝法

(标: 标准蛋白质溶液, F : FOLIN 试剂: K: 考马斯亮蓝 G250 试剂。自己制备的蛋白质溶液测定含量时注意稀释度)

1.  蛋白质样品和呈色剂都不应有沉淀, 有沉淀应过滤除去。

2.  染料与蛋白质结合后, 形成的蓝色复合物易轻度沾附试管壁或比色皿, 每次使用不能用有着色的比色皿。使用完后应立即清洗干静。