蛋白质的抽提实验

实验材料 转型菌株pQG11 M15 [pREP] 单一菌落

试剂、试剂盒 LB amp kan液体培养基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮

仪器、耗材 恒温震荡培养箱高速冷冻离心机离心管冰筒

实验步骤

一、仪器用具

恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速绝对不能超过最高速限；液态氮及冰筒；37℃温水浴。

二、药品试剂

转型菌株pQG11/M15 [pREP] 单一菌落；LB/amp/kan 及IPTG （1 M stock）；Lysis buffer （50 mM Na3PO4·12H2O， pH7.0； 0.1 M NaCl；0.1 mM EDTA； 0.2%Triton X-100）使用前添加成10 mM β-mercaptoethanol，25 μg/mL PMSF，40 μg/mL lysozyme.Buffer A-0 （50 mM Na3PO4， pH7.0） 使用前每1 L 添加70 μL β-mercaptoethanol 成为10 mM 最终浓度。Buffer A-150: Buffer A-0 再加有0.15 M NaCl；硫酸铵（要烘干并以研砵磨碎）。

三、方法步骤

1.  挑取培养皿上单一菌落，培养在15 mL 的LB/amp/kan 液体培养基中，以120 rpm 转速震荡，在37℃下培养过夜。

2.  取上述菌液6 mL加入300 mL新鲜LB/amp/kan培养基中，以120 rpm 37℃培养至A600 = 0.6 后，加入IPTG成为1 mM浓度，继续以120 rpm在37℃震荡培养4 h。