1. 制备裂解液；
2. 溶液内或凝胶内进行酶切；
3. 使用离液剂（如尿素和胍）使蛋白质变性；
4. 使用DTT还原二硫键；
5. 使用碘乙酸或碘乙酰胺将半胱氨酸烷基化；
6. 去除试剂和交换缓冲液；
7. 在适当的pH和温度下，用胰蛋白酶或其他蛋白酶在碳酸氢铵缓冲液中过夜变性约18小时；
8. 加入酸类物质终止酶切。
9. 蛋白质富集/清洗。
