发布时间:2019-03-28 15:55 原文链接: 蛋白质的生物合成标记实验(三)

实验材料

细胞

试剂、试剂盒

甲硫氨酸PBS

仪器、耗材

离心机培养箱

实验步骤

1.  准备和用[35S]甲硫氨酸标记细胞,用0.2~1 mCi/ml 的[35S]甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。

 

2.  脉冲标记后,除去[35S]甲硫氨酸培养基,用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次,加入10 ml 追加培养基继续培养。

 

3.  在37℃温育至设定时间。悬浮培养细胞在盖紧盖子的试管中旋转温育,贴附培养细胞在37℃ 5%CO2的加湿培养箱中培养。

 

4.  于4 ℃300 g 离心收集悬浮培养细胞,弃上清。

5.  刮下贴附培养细胞,并移入15 ml 圆锥试管,300 g 离心5 min,弃上清。用10 ml 冰冷PBS缓冲液洗1次,重复离心。

6.  处理及分析细胞。