蛋白质N端测序样品要求

检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪

一、 蛋白质N端测序的主要应用:

1. 样品：蛋白质，多肽样品的氨基酸序列测定

2.优势：能连续测定 60 个以上的氨基酸序列

3.来源:天然提取（动物/植物/微生物）；合成多肽；重组蛋白等

二、 样品要求:

1. 纯度:>95（基于摩尔数）

2.含量:50-100pmol(液体体积控制在 20ul)

3.修饰封闭:N 端未被封闭

4.样品形式:液体；干粉；PVDF 膜

5.无干扰物:蛋白酶；氨基酸；胺；盐分；乙醛；去污剂等

三、 客户提供信息:

1. 纯度：纯度检测结果及图谱信息

2.修饰：样品可能修饰情况

3.制备方法：如 SDS,HPLC 及其它方式

4.验证目的：提供理论序列

5.表观分子量

其它注意事项：

1. 邮寄要求：使用干冰冷冻保

2.液体样品：

可用溶剂：蒸馏水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以及三甲基胺水溶液。

不可用的溶剂：氨盐、Tris 等，含有 1 级、2 级胺的盐溶液，含有 SDS 的溶液

3.固体样品：

干燥处理的样品，请先确认干燥处理前的溶剂中不含有上述不兼容的溶剂。如果含有不兼容的溶剂时，请告知我方检测人员。

4.PVDF 膜：注意以下方面

1)样品量：5-8 条泳道，每条泳道的样品尽量用最高浓度样品，上最大体积（尽量使条带长胖为正常的 2-3 倍宽度）

2)硝酸纤维素膜：具有耐药性，不能使用。

3)在电转印中使用的缓冲液尽可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的缓冲液时，请告知我方检测人员。

4)染色剂推荐使用考马斯亮蓝（CBB-R250）。

5)推荐使用下列的 PVDF 膜：