血栓与止血临床检验的影响因素(3)

 三、抗凝剂与检测试剂盒的影响

    （一）抗凝剂

    1、抗凝剂  常用抗凝剂有0.109mol/L枸椽酸钠、26.86mmol/L EDTA-Na2和0.1mol/L草酸钠等。应用这些常用抗凝剂对实验结果有影响。用上述抗凝剂分别与血液严格按1:9抗凝，平行测定3次取其结果的均值，见表2。由表2所见，较理想的抗凝剂应首选枸椽酸钠。因为因子V和因子VIII在枸椽酸盐溶液中稳定性比在草酸盐溶液中为好。研究表明，在标本采集后的15分钟因子V活性就可降低。另外，采集于枸椽酸盐溶液中的标本对肝素敏感性高于草酸盐溶液的标本，这对于应用肝素的病人做APTT试验作为实验室监测就很重要。凝血试验一般推荐的枸椽酸钠抗凝剂的浓度是0.109mol/L或0.129mol/L（即3.2％的Na3C6H5O7·2H20溶液或3.8％Na3C6H5O7·5H2O溶液），抗凝剂与血液比例严格按1: 9。有研究表明，血细胞比容45％的病人，以抗凝剂与血液比例分别为1: 9和1: 5采血，其PT的结果分别为11.7秒和18.7秒，存在显著差异。不应使用变质的枸椽酸盐溶液，否则会使PT、APTT试验的结果缩短。研究也表明，非缓冲枸椽酸钠溶液pH若＞8.0，可破坏贮存标本的硅化试管的硅层，同时也破坏因子V和因子Ⅷ的活性，从而影响实验结果，所以最佳pH条件为5.8。

    着重指出，血细胞比容（Hct）的高低能引起血浆与抗凝剂之间比例的变化。所以当Hct增高>55％或<25％时，务必用MacGann推荐的公式计算抗凝剂的用量，公式如下：抗凝剂的用量(m1)＝0.00185×全血量(m1)×［1-Hct（%）］。否则检测结果不可信。丛玉隆等研究显示，血细胞比容(Hct)增高的病人因抗凝剂含量过高可使PT、APTT结果延长；Hct减低的病人因抗凝剂含量过低可使PT、APTT结果缩短，结果见表3。 

表3不同Hct对PT、APTT测定结果的影响（单位：秒）    

        2、抗凝剂+抗聚剂  已证实，枸橼酸钠抗凝剂不能完全抑制血小板活化，活化血小板会释放β-TG、PF4、vWF和PAI等，所以测定这些因子应选用抗凝剂+抗聚剂的抗凝剂。通常选用CTAD液［内含：枸橼酸钠0.11mol/L、茶碱（theophylline）l5mmol/L、腺苷(adenosine)3.7mmol/L和潘生丁(dipyridamol)0.198mmol/L]，其中腺苷作用是活化腺苷酸环化酶，增加血小板内环磷酸腺苷(c-AMP)浓度，减少体外血小板活化；茶碱和潘生丁通过抑制磷酸二酯酶的活性，在一定程度上能阻止c-AMP的降解；潘生丁还能阻止红细胞摄入腺苷，从而有效的增加血小板腺苷应用量，活化腺苷酸环化酶，抑制血小板聚集和α颗粒内容物的释放。CTAD抗凝的优点，采血后血小板很少活化，且保存时间可超过15小时，这很实用。

    3、抗凝剂+抗纤溶剂在溶栓治疗的实验室监测中，若用常用抗凝剂会使纤溶系统持续激活可致纤维蛋白原及其降解产物(FDP)的定量比现差异。应该使用“抗凝剂+抗纤溶剂”的抗凝剂，抗纤溶剂可选用抑肽酶，它可以抑制激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血因子和纤溶活性，能精确的测定纤维蛋白原，但会引起凝血酶时间(TT)的延长。

    （二）检测试剂  目前，商品化的凝血活酶和部分凝血活酶试剂的品种繁多。因各种凝血活酶试剂对因子Ⅶ的敏感性不同，故导致PT检测的结果也不相同；同样，活化部分凝血活酶试剂对因子Ⅷ、因子Ⅸ的敏感性不同，故导致APTT检测的结果也不相同。因此，检测试剂的选择应掌握下列原则：

    1、根据试剂的重复性和敏感性，按照实验操作方法的要求选择合理的试剂。以APTT为例，APTT试验通常以磷脂作为接触表面，用白陶土、硅藻土或鞣花酸作为激活剂，这些激活剂对肝素、狼疮抗凝物、因子Ⅷ和因子Ⅸ的敏感性各不相同，在检测中就应根据不同的对象选择合理的激活剂，结果见表4。

      表4不同激活剂对APTT的敏感性比较