血栓与止血临床检验的影响因素(4)

 2、按照仪器性能选用匹配的试剂，某些凝血活酶和活化部分凝血活酶试剂不适用于部分仪器：如浑浊的或含颗粒的凝血活酶和活化部分凝血活酶试剂就不能用在光学法判断终点的仪器上，有些试剂为了保证其中的颗粒处于悬浮状态，在使用前必须充分混合。

    3、使用商品试剂必须严格遵循产品说明，用于口服抗凝剂监测的PT试剂必须按WHO的要求进行标化，用国际参照制剂校准凝血活酶，提供国际敏感度指数（ISI），结果以国际标准化比值（INR）报告。例如，同一标本在两个实验室分别用ISI为2．8和1．2的组织凝血活酶试剂检测，其PT的结果分别为20.5秒和42秒（正常对照值为12秒）；凝血酶原时间比值（PTR）分别为1.71和3.50，上述两种表示PT结果的方法相差非常悬殊。但是，经过计算INR见其结果却都在3.0~4.5范围内，口服抗凝剂的用量属于同一水平，无显著差异。

    （三）正常对照血浆  许多实验都需要正常对照，以避免实验操作造成的误差。正常对照血浆要求采集20份以上，年龄在18~55岁间的健康男女个体，删除服药者，须在平静状态下采血。血液经抗凝离心后，分离血浆等量混匀，分装小瓶，冻存于-80℃备用或冷冻干燥。

    （四）标准品  标准化是质量控制的重要组成部分，方法标准化对不同的实验室来说是有困难的。为了使检测结果在同一实验室或不同实验室的不同时期有可比性，就要使用标准品。WHO已建立了十多种血栓与止血的国际标准品，如β-TG（83/501）、PF4（83/505）、vWF（87/718）、蛋白C（86/622）、t-PA（86/670）、FVIII（80/511）、AT-III（72/1）、HBPM/LMWH（85/600）、纤维蛋白原（89/644）等，可以选用。

四、设备和仪器的影响

    （一）设备的影响检测所用的设备，主要是试管、注射器、离心机和温育箱等，现以不同品种的试管对测定结果的影响为例说明。

    有人取10份用0.109mol/L枸椽酸钠抗凝的血样本，每份分别用硅化试管、塑料试管和普通玻璃试管盛装，平行测定3次取检测的均值，结果见表6。实验结果表明，以硅化试管为最佳，凝血因子损耗最少；塑料试管除因子Ⅻ与硅化试管有显著性差异（P<0.01）外，其余差异不显著（P>0.05）。普通玻璃试管最差，与硅化试管的差异显著(P<0.05)。因此，在检测出凝血试验中，要求使用硅化试管或塑料试管，不用普通玻璃试管。    

表5不同试管对测定结果的影响（n＝10，X±s）    

     注：与硅化试管组比*P<0.05**P<0.01    

    （二）仪器的影响  目前多种自动化的仪器，广泛应用于检测出凝血试验。仪器的检测原理有①光学法（比浊法）；②生物化学法（比色法）；③免疫学法（透射比浊法、散射比浊法和胶乳比浊法）；④干化学技术法；⑤超声分析法等。不同品牌和不同原理的仪器对检测的结果也有不同。有研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coag-a-Pet三台血液凝固分析仪上，使用同一种ISI为1.12的Thromborel S试剂，测定PT的正常值分别为10.7秒、12.1秒和11.0秒，但若用同一ISI值计算INR，得出数值也存在不同程度的差异。所以，近年有人提出区域性ISI（Local ISI）的概念，认为每台仪器上使用的凝血活酶试剂都应有特定ISI值，而不应使用厂商标定的ISI值，重新标定ISI值的做法是购买标有INR的冻干血浆，然后在自己所用的仪器上再标定凝血活酶试剂的ISI值，这样才能使病人INR的结果具有可比性和可信性。