血栓与止血临床检验的影响因素(6)

七、血小板聚集试验的影响因素

    血小板的相互粘附则为聚集。体外多种物质如ADP、肾上腺素、胶原、凝血酶和花生四烯酸等均可引起血小板聚集。在富含血小板的血浆（PRP）中加入上述诱导剂来检测血小板的聚集功能即为血小板聚集试验。影响血小板聚集试验的因素有：

    1、诱导剂  常用的二磷酸腺苷（简称ADP）、肾上腺素、胶原、凝血酶、5-HT和花生四烯酸等。不同诱导剂以及不同浓度均可导致不同结果。

    由于不同诱导剂引起的聚集机制不同，因此不同诱导剂的应用反映了血小板不同的缺陷。根据不同的实验目的选用不同的诱导剂也很重要。我们曾对服用阿司匹林的受检者的血浆用花生四烯酸、ADP、胶原和瑞斯托霉素四种不同诱导剂进行血小板聚集功能的测定，发现最敏感的是花生四烯酸，而瑞斯托霉素则没有反应。

    ADP的浓度影响着血小板聚集的速度和强度，低浓度产生可逆性聚集，高浓度ADP产生不可逆性聚集。一般报道的最低浓度与临界浓度为3×10-8mol/L~3×10-6mol/L。胶原引起的聚集是通过血小板释放引起的。在加入胶原后有一段明显的延迟相，然后才有透光度急剧的增加。它的活性随原料和制作方法不同可有很大差异。肾上腺素可引起双相型聚集曲线，第一相变化与肾上腺素浓度有关，第二相变化与ADP释放有关，其作用浓度为5×10-8mol/L~5×10-6mol/L。

    2、PRP中的血小板数  PRP中的血小板决定了血小板的碰撞率，影响到聚集的速度、程度和性质。因此测定中必须固定PRP中的血小板数，一般选用200×109/L~500×109/L范围。不过这种影响在ADP中较明显，用肾上腺素时小些。

    3、搅拌条件  指搅拌速度和搅拌的形状，二者均影响血小板碰撞率，搅拌速度为120rpm，不出现聚集，500rpm时，聚集程度虽与1000rpm时相同，但聚集速度较慢。目前使用的血小板聚集仪搅拌速度都固定为1000rpm，搅拌棒的粗细长短均已选定。

    4、采血后测定时间  采血后不及时测定会影响聚集强度和速度，特别是释放反应。引起聚集反应下降的原因可能与一种“血浆不稳定”性因素增加有关。如采血后30~120分钟内的PRP，在低浓度ADP引起的聚集速度和高浓度ADP引起的第一、第二聚集相，解聚速度均有下降。因此应当固定和限定测定时间，一般认为采血后2~3小时测定对结果影响不大。

    5、放置PRP的温度  血小板在冷的环境下可发生外形改变及粘附、聚集能力增加，或出现自发性聚集。其原因可能与有利于ADP释放及阻止解聚有关，或是阻止一种原因不明的体外破坏作用以及影响诱导剂作用之故。故血标本采集后置于室温即可。

    6、抗凝剂  钙是血小板聚集中重要的因素，由于种种原因造成枸橼酸在PRP中浓度的变化均可影响聚集结果。一般用0.l29mol/L枸橼酸抗凝。

    7、pH值  由于病理性的酸中毒或碱中毒，以及由于CO2的弥散使暴露于空气的PRP的PH值变动，均可影响聚集结果。当血浆标本偏酸时，肾上腺素引起的聚集受抑，偏碱性时聚集增强。

    8、红细胞的混杂、溶血及血浆脂类  这类因素的存在主要是降低悬液的透光度，从而掩盖血小板聚集变化。当PRP中混入的红细胞过量时，即可产生这种影响。

    9、白细胞  白细胞对ADP、5-HT和凝血酶引起的聚集和解聚有影响，它能迅速灭活ADP。

    10、月经和妊娠雌性激素对聚集和释放功能有影响，如妊娠时第二相速度加快，排卵期时ADP和肾上腺素引起的第二相却很常见，而经期和黄体期则罕见。

    11、种属差异  各种哺乳动物的血小板聚集特性及对诱导剂的反应是十分不同的。而且血浆对外源性ADP聚集活性速度也有种属差异。此外，不同地区人的血小板聚集功能也不同。

    12、抑聚剂  有许多种抑聚剂，如腺苷、前列腺素、阿司匹林、潘生丁、保泰松和低分子右旋糖苷等，其中有的药物抑制聚集第一相，有的抑制聚集第二相，有的仅在大剂量时出现抑制作用。

    综上所述，影响血栓与止血检测因素众多，不仅临床医师需要了解，特别是检测人员更需要熟知，做到在检测的全过程中，处处和环环都必须倍加注意，才能保证检测结果有最大的准确性和可靠性。