血液检验室内质控存在的若干问题及其对策

   室内质量控制(IQC)是由实验室人员采用一系列方法，连续的评价本实验室工作的可靠程度，确定报告能否发出，是保证实验室工作质量的重要措施。目前血站系统检测抗HCV、抗-HIV　HBsAg均采用ELISA法。ELISA有其自身的特点如灵敏度较高，同时影响因素也较多，这就更需加强质量控制。本文就实验过程中出现的一些问题及其对策报告如下。

1　质控物

　　室内质控的开展要求有高质量的质控物，质控物的好坏直接影响监测，一般基层单位均选用卫生部临检中心提供的免疫质控血清，其具有良好的质量保证，但是在贮存运输和使用过程中受许多因素的影响。质控物的购买应避开7、8、9高温季节，以免邮寄过程中造成含量下降。质控物要求-20℃保存，而质控物含量较低，4℃存放也会使含量下降，一般HBsAg使用3d，抗-HCV使用1周即需更换。避免反复冻融，因反复冻融能使蛋白质变性抗原成份及空间构象发生改变。还可选用上海或其他血液中心提供质控品，作可比性试验以验证。

2　试剂

　　1994年10月起卫生部对体外诊断试剂实行统一管理批批检定。目前使用的国内试剂厂家很多，能通过批批检只是起码要求，其灵敏度和特异性都有差异。加之运输储存多种因素影响，到用户使用时质量已经发生了不同程度的变化。选购试剂时，省级以上的血液中心可以成立“试剂评价系统” ［1］ ，由质控科、检验科、研究所共同参与组成，研究所研制供应血清盘并制定标准，质控科负责用研究所供应血清盘对新购试剂评价，检验科在大标本的筛选中评价现用试剂日间差、板间差、初复检阳性率比较及操作可行性；基层单位用量少每批都做Panel是不现实的，希望卫生主管部门能否提供一种排除商业性具有指导意义的方案或者提供价低质高的血清盘。就目前可参考权威部门发布的试剂评价结果，还可到大血站、临检中心等单位了解一下哪种厂家哪一批次的质量可靠，然后向厂家查询丙肝的包被片段，初检试剂选片段多而全、灵敏度高的，复检选特异性好的试剂。

3　加样与稀释

　　3.1　由于免疫试验加样仅10μl，多加或少加1μl就可造成10%的误差，因此移液器的准确性需经常校验，最好使用进口移液器，同时移液器和移液头间连接应严密，建议取样时移液头应刚进液面，以免粘带血清。稀释液勿用滴瓶滴加，以免造成稀释倍数的变化，对灰带区造成误判，使用移液器加样较稳定。

　　3.2　稀释方式①在板中加入100μl稀释液再加10μl标本，待样品全部加完混匀；②预先进行1∶11稀释然后加到每孔中；③在板中加入100μl稀释液再加10μl标本，同时吹吸3次混匀。根据陈宇 ［2］ 的报道第1种方式易致非特异性IgG吸附到包被抗原或固相载体上，第2种方式在大量标本检测时亦不适用，以第3种方式为好。

4　温育

　　37℃温育常采用3种方式即恒温培养箱、水浴箱和电热块，根据张利等 ［3］ 的报道以恒温培养箱为佳，由于培养箱中板的周围都是37℃，而水浴箱的温度指标的是水的温度，虽然酶标板漂浮在37℃水浴中板底37℃，但空气温度在开盖时会下降(尤其在冬季)，温度上升比培养箱慢，达到37℃所需时间长，导致吸光度下降。

5　洗板

　　一般基层单位洗板机不提倡使用96孔头而选用8或12孔头，应随时注意孔头是否堵塞，同时要求洗板后残液＜2μl即人工扣板垫纸不湿，浸泡时间＞45s。洗液预先用合格的蒸馏水配制并充分溶解，保持PH正常。定期清洗容器防止长菌长霉，这些都是防止花板、本底增高的重要措施。

6　显色

　　严格按说明书控制显色时间、温度以免人为造成吸光度升降，而影响灰区结果，加终止液后及时比色。TMB被认为是ELISA反应中最佳色原底物，但终止15min后高浓度者易产生灰褐色絮状沉淀并伴黄色渐退吸光度下降，建议终止15min内及时比色 ［4］ 。

7　酶标仪性能评价与鉴定

　　卫生部明确规定酶标试剂不得用目测法判结果，仪器和设备是搞好质控和日常工作的前提和保证。成军等 ［5］ 介绍了一套以490nm、甲基橙溶液为例的酶标仪的评价方法，内容包括滤光片波长、零点飘移、线性、精密度、通道差与孔间差等，具有较高的实用价值。经常维护其光学部分防止滤光片霉变、定期检测校正，使其保持良好的工作性能。

8　质控图的制作

　　ELISA室内质控方法一般沿用生化L-J图进行，利用Westgard规则判定失控，应首先做好OCV和RCVK以确定失控标准，在实际工作中取得很好效果。“即刻法” ［6］ 质控只需连测3次即可对第3次进行质控，给基层单位带来了方便。但是其SDI设置是套用生化的手段，在免疫检测中是否适用尚无定论，同时L-J图不能判ELISA的特异性。鉴于ELISA试验目的在于检出抗原或抗体，因此要确保敏感性和特异性，故许斌 ［7］ 提出临界值血清界定法：试剂所设阴阳对照为内对照，另设临界值、高值阳性和2份正常人阴性对照，作为外对照与标本同时检测，临界值S／CO＞1，高值阳性S／CO＞10，正常人阴性对照A值在0.050～0.100，只要一项不符合即判为失控，其中临界值为敏感度监控、阴性对照为特异性监控、高值为“HOOK”监控，因此临界值血清界定既反映ELISA的灵敏度又兼顾特异性，实际工作中和质控图一起应用。

9　结论

　　室内质控的目的在于能控制实验室每天的检测结果是否可靠，能否报告，是实验室管理的最基本措施。临界值血清做室内质控血清可防止弱阳性标本漏检，每次实验时随献血者标本加测，每板一孔如未失控证明实验可靠，原始记录保存可作因输血所致医疗纠纷的一个关键证据。实验过程中失控现象时有发生且以超过下限为多见，致临界值结果阴性，此点应引起特点重视，必须将失控板重做并找出原因，以确保报告准确性。由于开展了室内质控，工作人员责任心加强了，操作更规范，提高了实验检测的准确性，有效保证了血液的质量。

参考文献

　　1，高东英.采供血机构体外免疫诊断试剂评价系统的初步探讨.中国输血杂志，1999；12(1)∶56

　　2，陈　宇.加样方式影响ELISA检测抗HCV结果.临床检验杂志，1996；14(3)∶151

　　3，张　利，李　博，李　文.两种温育方式对ELISA检测抗HCV结果影响.中国输血杂志，1997；10(4)∶196

　　4，田　昱，邹荣良，陆伟石.四甲基联苯胺作色原的ELISA两种波长测定.临床检验杂志，1995；13(3)∶140

　　5，成　军，孙关忠，李早荣等.酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及应用，见：郑杯竟，邢文革主编.免疫检验与临床疾病安全输血.北京医科大中国协和医科大联合出版.1997；265～272

　　6，郑怀竞.免疫学检验室内质评与室间质评.北京医科大中国协和医科大联合出版.1997；49～53

　　7，许　斌，毛爱珍.EILSA定性试验室内质控.临床检验杂志，1996；14(3)∶124