表达谱芯片的介绍与应用

相关背景资料main

基因表达谱芯片的原理a1

简单地说就是在一块有多聚赖氨酸包被的硅片上或其它固相支持物（如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊处理：作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基——视所要固定的分子为核酸或寡肽而定，并与保护基建立共价连接；作点样用的支持物为使其表面带上正电荷以吸附带负电荷的探针分子，通常需包被以氨基硅烷或多聚赖氨酸等）将生物分子探针（Oligo或cDNA）以大规模阵列的形式排布，形成可与带有标记的目的分子（如荧光染料Cy3、Cy5标记的cDNA）相互作用、交行反应的固相表面，在激光的顺序激发下标记荧光根据实际反应情况分别呈现不同的荧光发射谱征，电压耦合元件相机或激光共聚焦显微镜根据其波长及波幅特征收集信号，作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。

双色荧光标记a2
cDNA基因表达谱分析常使用的双色荧光标记是利用竞争性杂交的原理，将对照组及测试组样品的总RNA或mRNA 分别以不同的两种荧光染料（如Cy5和Cy3）进行逆转录标记，然后将标记产物等量混匀，与固定在玻片上的探针cDNA分子进行竞争性杂交。检测并计算两种荧光强度的比值，可以得出两组样品间的基因表达差异。