论细胞计数和活率检测在磁珠分选的重要性

　　磁珠分选方法是常用的分选方法之一，用于免疫学、神经学、干细胞、肿瘤细胞等多个研究领域，把一种细胞从多细胞样品中快速、便捷地分离出来。评估磁珠分选的主要指标包括：

　　◇纯度：纯度越高，分选效果越好；

　　◇得率：得率越高，成本控制和分选效果越好；

　　◇细胞活率：分选细胞活率越高，分选效果越好。

　　有很多因素影响到纯度和得率，如抗体特异性、磁珠大小、分选前细胞的数量和活率等。其中磁珠大小和抗体特异性主要取决于磁珠分选产品的厂家，选择优质品牌产品是实验成功和可靠的关键，这是众所周知的道理，只需要研究者判断品牌的优劣。但是分选前细胞数量的计数和活率的检测，这些看似简单又容易被忽略，却也是影响分选得率和纯度，以及分选后细胞活率的关键因素。

　　在这里我们以Human CD4+ Cell分选为例来阐述细胞计数和活率检测的重要性。

　　第一步 PBMC的密度梯度离心分离

　　为了磁珠分选步骤能获得更多的CD4+细胞，首先我们对全血进行初步分离即密度梯度离心，获得相对纯度较高的PBMC细胞。

　　密度梯度分离后，我们需要进行PBMC细胞的精确计数，因为抗体磁珠的加入量需要根据细胞数量及体积进行调整；以及进行PBMC细胞存活率的检测，确定分离的PBMC细胞状态是否还适合进行下一步的分选（通常PBMC存活率在90%以上适合进行下一步分选）。

　　AO/PI双荧光计数PBMC和存活率

　　第二步 分选前磁珠分选buffer洗PBMC细胞

　　经过多次的清洗和离心，会丢失不少细胞，因此加入磁珠抗体前的最后一步清洗，一定要进行细胞计数和检测活率。

　　第三步 分选后细胞的计数和活率检测

　　磁珠分选后所得细胞数量和细胞状态如何，是后续实验是否能顺利进行的前提。

　　从上而看这个磁珠分选的过程都需要检测细胞的数量和细胞的活存率，以监测整个分选过程，以及保证细胞分选的得率和纯度；PBMC中不同程度的混杂着红细胞和血小板，AOPI双荧光核染料可以排除血小板、红细胞等无核细胞的干扰，精确计数PBMC和活率。