罗托综合征主要依赖辅助检查明确诊断，有以下情况可以考虑本征的诊断。
1、血清学检查
血清总胆红素在68.4～119.7μmol／L之间波动，70%～80%为结合胆红素。若肝细胞摄取非结合胆红素障碍，以非结合胆红素占优势。
2、磺溴酞钠试验
罗托综合征的特征性改变为注射磺溴酞钠45分钟后的平均潴留值为46%±8%，有时可达98%，但无第2次高峰现象。
3、吲哚氰绿排泄试验
显示吲哚氰绿潴留明显增加。
4、尿粪卟啉
尿粪卟啉总量＞610mmol/24h，而先天性非溶血性高结合胆红素血症I和Ⅲ型异构体分布正常。
5、其他
尿胆红素阳性；肝功能无异常；胆囊造影多数正常；肝穿刺活检显示肝组织结构正常，细胞内无色素颗粒。