试剂盒酶的底物分类

酶的底物

1.3.3.1 HRP的底物 HRP催化过氧化物的氧化反应，最具代表性的过氧化物为H2O2，其反应式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O上式中，DH2为供氧体，H2O2为受氢体。

2.在ELISA试剂盒中，DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产品，以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基联苯(3,3",5,5tetramethylbenzidine, TM和ABTS[2,2"-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

3.OPD氧化后的产品呈橙红色，用酸中止酶反应后，在492nm处有最高吸收峰，灵敏度高，比色便当，是HRP结合物最常用的底物。OPD自身难溶于水，OPD?2HCL为水溶性。曾有报道OPD有致异变性，操作时应予留心。OPD见光易蜕变，与过氧化氢混组成底物运用液后更不安稳，须现装备现用。在试剂盒中，OPD和H2O2一般分红二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂方法，片剂中含有发泡助溶剂，运用更为便当。

4.过氧化氢则配入底物缓冲液中，ELISA试剂盒有制成易保存的浓缩液，运用时用蒸馏水稀释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的作业浓度为0.02% H2O2的运用液,只需参与OPD后即可作为底物运用液。TMB经HRP作用***产品显蓝色，目视对比明显。

5.TMB性质较安稳，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成运用液，可直接作底物运用。其他，TMB又有无致癌性等利益，因此在ELISA中运用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4中止后，TMB产品由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为405nm。

6.ABTS虽不如OPD和TMB灵敏，但空白值极低，也为一些试剂盒所选用。另一种HRP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，经HRP作用后，产品显荧光，可用荧光光度计测量。用于ELISA的利益为可加宽定量测定的线性规划。

7.HRP对氢受体的专一性很高，ELISA试剂盒仅作用于H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。H2O2运用最多，但尿素过氧化物为固体，作为试剂较H2O2便当、安稳。试剂盒供应尿素过氧化物片剂，用蒸馏水溶解后，在底物缓冲液中密闭、低温（2～8℃）可安稳1年。