豆粕中的粗蛋白检测方案

一．原理

凯氏法测定样品中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

二．试剂

1. 硫酸：分析纯，含量为98%，无氮。

2. 催化剂：（硫酸铜：硫酸钾为1:10的混合物）

3. 40%的氢氧化钠

4. 2%的硼酸+甲基红和溴甲酚绿混合的显色剂

5. 盐酸标准溶液：c(HCL)=0.1mol/L。8.3ml盐酸（分析纯），注入1000ml蒸馏水中。

6. 硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：称取100 g硼酸，加水溶解后并稀释至5000 mL。加入（1：3.5混合指示剂6ML）摇匀，再加入5%的氢氧化钠稀释溶液0.35ML摇匀，颜色呈紫红色。

7. 蒸馏水

三．仪器设备

1. 样品：豆粕粉末

2. 万分之一天平

3. 红外石英消化炉SKD-08S2

4. 容量瓶100ml

5. 滴定管：10、25ml

6. 消化管：300ml

7. 全自动凯氏定氮仪SKD-1000

8. 自动定氮仪SKD-800

四．分析步骤

1. 样品的消化

称取样品0.2g和0.6g各3各(含氮量5~80mg)准确至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化剂，与样品混合均匀，再加入10ml硫酸，将消化管置于消化炉上加热，直至呈透明的蓝绿色，然后在继续加热，至少30分钟。

1. SKD-08S2消化炉

2. 6个样品和2个空白）

3. ”SET”键+“A/M”键3秒，跳出第二设置区程序参数修改界面。连续按“SET”键数次出来

4. “RUN”=“3”，pro= “ 1 ”  ，再设置r1 =200，T1=5分钟，c1=180度，r2=180，T2=5,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=60，c4=400，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,设置好后等几秒钟，程序会自动保存。

5. -----------程序自动运行，自动结束。如果出现不运行，再检查“RUN”设置为“3”，pro= “ 1 ”  。

1. 样品消化好后，冷却至室温。

2. 全自动定氮仪

3. 45ml，稀释液40ml，标准酸HCL  0.1040（moL/L），蒸馏功率100%，蒸馏时间6分钟，硼酸SKD-1000全自动定氮仪自动加。

4. 自动凯氏定氮仪

5. 45ml，稀释液40ml，标准酸HCL 0.1040（moL/L），蒸馏功率100%，蒸馏时间6分钟，加硼酸50ml

6.