质粒DNA的小量制备实验——

DNA

LB培养基卵清溶菌酶异丙醇TE

离心机漩涡混合器水浴锅

一、实验步骤

1.  接种一个单菌落于5 ml 培养基中，于37℃培养至饱和状态。

2.  取1. 5 ml 菌液离心20 s 加入300 ul 200 ug 溶菌酶的STET溶液，在旋涡混合器 上振荡混匀，冰上放置30 s~10 min。

3.  将管放入沸水中（100℃）1~2 min 离心15~30 min，吸出上清移入一个新的微量离心管中。
 

4.  加入200 ul预冷的异丙醇，于-20℃放置15~30 min。

5.  离心5 min，弃上淸，真空干燥。

6.  沉淀溶于50 ul TE缓冲液中，保存，取进行限制性酶切分析。

二、质粒DNA保存

1.  短时间保存可将选择培养基上的菌落保存于℃；长时间保存可将菌液-70℃保存于甘油或DMSO溶液中。

2.  从保存在选择平板上挑取菌落进行培养，并通过限制酶分析检测质粒。

3.  溶于TE缓冲液的质粒DNA可在4℃短时间保存，并可于-20℃或-70℃长时间保存。