质谱分析水杨酸（SA）中葡萄糖醛酸代谢产物定量方法开发的思考

前言

前几天和一位友人讨论他的毕业课题，其主要目的是定量分析其代谢物在尿液中的暴露量，其它的代谢物均完成了定量分析，但在葡萄糖醛酸代谢产物的定量上遇到了一些困难，现就对其方法开发中需要注意的问题跟大家分享下：

①酶的来源，不同来源具有不同的酶解活性和最近工作PH

②酶解的环境，不同PH环境中，酶的活性不一样

③酶解的时间，

④酶的浓度，酶加入量的多少，决定了酶解的完全程度

①能够分别买到SAAG与SAG的对照品，且对照品的纯度足够的高，不产生相互干扰

②SAAG与SAG因分子量一样，需要色谱分离

• 因SAAG与SAG因分子量一样，需要色谱分离，才能定量分析。可能需要用到一根较长的柱子以及较缓的梯度，已达到较好的分离效果

• 葡萄糖醛酸为II相代谢产物，一般二相代谢产物为极性分子，且常常是无活性的，因而可以较快由体内排泄。因此它logP值一般较低，在常规色谱柱上有可能不保留，需要使用亲水性色谱柱

• 尿液中缺少蛋白质和脂类(血浆中含6%~8%的蛋白质),因此药物容易与采集容器非特异性结合。
• 大体积样品需要更长的时间冻融，尿液样品的冻融可能引起细胞碎片及盐类的析出,导至样品异质化。
• 放置过久细菌分解尿液成分可导至pH改变，或因尿中的碳酸氢盐分解产生的二氧化碳会自然扩散到空气中，使pH增高。

• 水解和酰基移换在·中性和碱性条件下更易发生。为了防止和减缓这个过程,生物样品(血液、血浆、样品提取物)通常应在低温下处理并保持在酸性条件。
• 尿液具有轻微的酸性,使得其相对稳定;但是尿液的pH常变化,这可能与其所含药物和处理储存的条件相关。在样品的收集、储存和处理中,保持尿液的酸度是至关重要的条件。

• 一般认为ESI应优先于大气压化学电离(APCI)，以减少内源CID或化合物的热分解

• ESI源的锥孔电压参数与源温度对源内裂解起主要作用

• 不同的加和离子，+NH4，以及负离子模式（-H），优于正离子模式（+H）

• 真实基质和真实分析物

• 替代基质和真实分析物

• 替代基质和真实分析物