赤霉素类物质浓度测定实验

实验方法原理:定量测定赤霉素类物质有许多方法：如大麦糊粉层α－淀粉酶诱导形成法，酸模叶片保绿法，小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法，水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围（0.1－100pp M ）内，叶鞘的伸长与浓度成正比。

实验材料：水稻种子 

仪器、耗材：

烧杯                                                                 

高压锅                                                                 

玻璃箱                                                                  

玻璃尺

实验步骤：

一、材料与设备

水稻种子

高约6cm 直径约4cm 的玻璃杯或烧杯，高压锅，边长约30cm 高约15cm 的正方形玻璃箱，1 MM 3微量注射器，能分辩1 MM 的玻璃尺。

药品：

100pp M GA3:10毫克GA3溶于100  ml 50%丙酮中。

1%琼脂：将称好的琼脂剪碎，按1：100（W/W）浸入水中，在15磅高压下灭菌20分钟。在琼脂溶胶尚未凝固前倒入玻璃杯中，至溶胶高度达5cm 为止。

饱和漂白粉溶液

二、实验步骤

1．取籽粒饱满的水稻种子，用漂白粉溶液灭菌30分钟，冲洗后再加适量的水，使能盖过种子，在30℃黑暗中发芽2天。

2．种子露白后，选芽长2 M  M 的种子，胚芽朝上，排在小杯中的琼脂凝胶上。每杯排放10粒左右种子（见图6）。小杯放进玻璃箱内，盖上盖，放进恒温培养箱中，在30℃，2000－6000勒克斯光照下培养2天。

图1 选取芽鞘长达2毫米的种子放置                                           图2 小心将1微升GA3的丙酮溶液

小杯内的琼脂上在连续光照下培养              滴于胚芽鞘与第一叶之间

3．精选第二叶叶尖刚伸出第一叶，苗高0.9－1cm 的幼苗，将不符合的拔去。

4．用50%的丙酮将100pp M 的GA3稀释成0.1，1.0，10，100pp M 的GA3溶液。

5．从恒温培养箱中取出小烧杯，编号，分别用0.1，1.0，10，100pp M 的GA3处理，对照为50%丙酮溶液。处理方法为：用微量注射器将3 M  M 3GA3溶液小心滴于幼苗的胚芽鞘与第一叶叶腋之间（见图7），勿使滑落。如小滴滑落，应立即拔除这一幼苗。每一浓度至少重复三杯。

6．所有点了样的小杯再放入恒温培养箱中培养3天。

7．测定第二叶叶鞘长度（如图8）。

结果

以GA3浓度的对数为横坐标，第二叶叶鞘长度为纵坐标，绘图，此为标准曲线，从中可以查出待测样品中的赤霉素类物质的活性相当于多少浓度GA3的活性。

图3  实验终了时测第二叶叶鞘的长度