转化细胞培养技术中的准备工作

一、转化细胞准备工作
 
准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。
 
1、清洁、消毒、液体
 
直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子
 
直接接触细胞的用品要彻底消除微生物
 
超净和消毒过的样品要密闭保存，标记消毒时间
 
实验室保持洁净，随时消毒
 
尽量采用商品化一次性用品
 
操作者也要清洁和消毒
 
缓冲液要符合生理渗透压（280～310 mOsm）和pH（7.2～ 7.4 ）
 
2、玻璃器皿超净
 
去污剂煮沸30min（超声波震荡30min） 温水刷洗 流水冲洗 酸性洗涤液浸泡 流水冲洗 蒸馏水冲洗 纯水漂洗 在洁净温箱中烤干 密封消毒
 
3、消毒
 
干热——玻璃器皿  160℃，120min
 
湿热（高压，120 ℃ ）  10~20磅，20~30min
 
紫外线——空气
 
消毒剂——场面
 
微孔过滤——液体  0.22um、0.45um
 
二、转化细胞生长的条件和培养基要求：
 
选择合适的培养基，保证全过程的无菌
 
细胞的营养需要：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、蛋白质、促生长因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10％的胎牛或新生牛血清。