转基因拟南芥重金属含量和种子萌发率的测定

实验概要

本实验对转基因拟南芥的重金属含量、种子萌发率及根长度进行了测定。

主要试剂

CdSO₄，Na₃AsO₄，HNO₃ : HClO₄ (10:1，v/v)混合液，1/2 MS培养基

主要设备

烘箱，研钵，SB-01原子吸收光谱仪(AAS，SOLAAR-M6，Thermo Jarrell Ash Co. (USA))，生长室

实验材料

野生型和转基因拟南芥

实验步骤

1. 转基因拟南芥重金属含量的测定

  1) 用500 uM CdSO₄和500 uM Na₃AsO₄处理盆栽的野生型和转基因拟南芥植株使得土壤中Cd和As的最终浓度分别为30.3 mg Cd/kg soil和22.7 mg As/kg soil。
  2) 处理4 days后，将植株从花盆中小心取出(尽量不伤害根部)，用流水冲洗5min，然后再用去离子水洗净后，分成根叶部(根 莲座叶)和茎部。
  3) 于105℃下杀青10 min，60-70℃下烘至恒重。
  4) 至少300 mg干样品粉碎后，用HNO₃：HClO₄ (10：1，v/v)混合液消解15 min
    5)   然后用SB-01原子吸收光谱仪(AAS，SOLAAR-M6，Thermo Jarrell Ash Co. (USA))测定重金属含量。

2. 转基因拟南芥种子萌发率和根长度测定

  1) 将拟南芥种子如前述方法消毒后，整齐地铺于含不同种类和不同浓度的重金属的1/2 MS培养基上，生长室中培养60 hr时对种子的萌发情况拍照。对于种子萌发率测定实验，将种子铺于用不同种类和不同浓度的重金属溶液湿润的滤纸上，生长室中培养60 hr时计算种子的萌发率。每组实验设三个重复，每个重复至少萌发50粒种子左右。

  2) 根长度的测定：将拟南芥种子消毒后，于1/2 MS培养基上培养3-7 days后，转移到含不同种类和不同浓度的重金属的1/2 MS培养基上，继续培养7-12days后，拍照，测量根长度和根数目。