（1）兔抗轮状病毒抗体最适浓度包被单数孔作为试验孔，正常兔血清包被双数孔为对照孔，每孔100μl，4℃ 24h以上，洗3次，干后4℃保存备用。
（2）待检粪便用0.01mol/L PBS稀释成20%悬液，3000r/min离心30min，取上清液，加等量稀释液（含20.0g/L牛血清清蛋白），每孔100μl，每份标本加试验孔和对照孔各2孔。每板均设阳性（病毒抗原）和阴性（正常粪便）对照各1份。4℃过夜，洗3次。
（3）将豚鼠抗轮状病毒抗体稀释成最适浓度，每孔加100μl，37℃ 1h，洗3次。
（4）加入酶标羊抗豚鼠IgG，每孔100μl，37℃ 1h，洗3次。
（5）加入邻苯二胺-H2O2底物溶液，每孔100μl，37℃ 20min。加入2mol/L H2SO4终止反应，用ELISA检测仪测定492nm吸光度。