还不懂大鼠肝实质细胞分离方法的请看过来！

　大鼠肝实质细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。

　　肝实质细胞是指具有肝功能的单位，是肝脏的基本组成单位之一。细胞的线粒体很多，每个细胞大约有1000个左右，遍布于胞质内。

　　大鼠肝实质细胞的分离方法

　　1、大鼠以3%C11H17N2NaO3麻醉后，依次碘酒、乙醇消毒。

　　2、以十字型切口打开腹腔，暴露内脏，将肠管推向腹腔的左侧，暴露出下腔静脉和门静脉，首先游离出下腔静脉，将胆总管结扎。然后分离门静脉，将其分支一一结扎，并在门静脉的近端和远端分别预置“0”号丝线一根，用针管内预先吸有肝素的l8号套管针穿刺门静脉，退出针芯，见门静脉有回血后结扎固定，迅速接通灌注系统，并剪开下腔静脉建立流出道，以20ml/min的速率灌注预灌注液(37℃)，同时将肝脏完整地分离下来，置入一平皿中。

　　3、灌注约10min后，肝脏完全变为淡黄褐色，关闭预灌注液三通开关，以15ml／min速率灌注50ml(25mg)链蛋白酶E灌注液，然后再以15ml／min速率灌注含Ⅳ型胶原酶的灌注液(37℃)。

　　4、将一根一次性输液管一端浸入培养皿液面以下，另一端插入胶原酶溶液瓶，建立胶原酶的循环灌注。

　　5、20～25min后，当肝脏组织完全变软，撕去肝包膜，去除结缔组织，钝性粉碎肝组织制备细胞悬液。

　　6、将细胞悬液倒入一预先装有100ml、37℃预热的振荡消化液硅化三角烧瓶中，将三角烧瓶放恒温振荡器中振荡消化30min(200r／min，37℃)，振荡消化后的细胞悬液依次经120目、300目钢网过滤，收集于2个50ml聚丙烯离心管中。

　　7、1700r／min离心5min(4℃)，吸弃上清液。每管加入40mlRPMI1640液，反复吹打，使细胞充分悬浮。

　　8、200r/min离心2min(20℃)2次，使细胞悬液中剩余的肝细胞沉淀，去除大鼠肝实质细胞。