透射电镜样品超薄切片常规制作规程

 　1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3

　　2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时

　　3．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min

　　4．锇酸固定：用1%-2%的锇酸固定2~3小时

　　5．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min

　　6．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min

　　7．置换：用环氧丙烷或丙酮置换3次，每次30min

　　8.浸渍：10hr以上，浸渍过程如下：

　　  ①丙酮：包埋剂=3：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）

　　  ②丙酮：包埋剂=1：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）

　　  ③丙酮：包埋剂=1：3的浸渍液浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）

　　  ④纯包埋剂浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）

　　9．包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；包埋剂配方中Epon812，MNA，DDSA，DMP-30的比例见附表

　　10. 聚合：将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr

　　11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm

　　12．超薄切片：切片厚度50-90nm

　　13．染色： 铀染色 5~15min清洗

　　      铅染色 5~10min清洗