实验方法原理
实验材料 质粒 DNA酵母株
试剂、试剂盒 10 cm 完全极限（CM） 缺失成分培养基平板YPD 平板 X-gal 平板
仪器、耗材 30℃ 培养箱
实验步骤
实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」
1. 用乙酸锂转化法将单个肽适配体捕获质粒与对照质粒（pJG4-5）转化人 EGY48 （Mata）。在 10 cm Glu／CM-Trp 平板上筛选转化株。
2. 用单独的靶蛋白诱饵（pBait） 加上 pSH18-34 （hcZ 报道基因）以及对照质粒（pEG202）加上 pSH18-34 转化 EGY42 （Mata）。在 10 cm Glu／CM-His、-Ura 平板 上筛选转化株。
3. 平行划线接种单个肽适配体及其对照捕获株到 10 cm Glu／CM-Trp 平板上。
4. 平行划线接种单个靶蛋白及其对照诱饵株到 10 cm Glu／CM-His、 -Ura 平板上。
5. 将所有的平板放置于 30℃ 培养过夜。
6. 复制靶蛋白诱饵酵母株平板和肽适配体捕获酵母株平板到同一个复制丝绒上：先复制诱饵酵母株平板，然后将捕获酵母株平板垂直正交复制到诱馆酵母株上。
7. 将酵母印迹转到一 10 cmYPD 平板上，于 30℃ 培养过夜。
8. 将 YPD 平板复制到一块复制丝绒上。将酵母印迹转印到下列指示平板上：
Glu／CM-His、-Ura、-Tip、-Leu
Gal／Raf／CM-His、-Ura、-Trp、-Leu
Glu／CM-His、-Ura、-Trp、X-gal
Gal／Raf／CM-His、-Ura、-Trp、X-gal
9. 分析平板的杂交配对情况。
杂交配对发生在 Mata 和 Mata 酵母株的交叉点上。二倍体的克隆能在 X-gal 平板上生长。在酵母株的交叉点上，肽适配体捕获株与靶蛋白诱饵株的相互作用能在半乳糖 X-gal 平板上产生蓝色并且使酵母株能生长于半乳糖-Leu 平板上。
注意事项
其他
1. 材料
质粒 DNA： pBait（S），肽适配体捕获质粒，PEG202，pJG4-5，pSH18-34
酵母株：
EGY42 ： Mataura3 trpl his3 Leu2
EGY48： Mata ura3 trpl his3 3LexA-operator-leu2
2. 试剂
10 cm 完全极限（CM） 缺失成分培养基平板，补加 2％（m／V）葡萄糖（Glu）或 2％ （m／V） 半乳糖和 1％ （m／V） 棉籽糖（Gal／Raf）：
Glu／CM-Trp
Glu／CM-His、-Ura
Glu／CM-His、-Ura、-Trp、-Leu
Gal／Raf／CM-His、-Ura、-Trp、-Leu
YPD 平板
X-gal 平板
Glu／CM-His、-Ura、-Trp、Xgal
Gal／Raf／CM-His、-Ura、-Trp、Xgal
3. 耗材
30℃ 培养箱