实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的pH调到4.7时,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
实验材料 牛乳
试剂、试剂盒 乙醇 无水乙醚 醋酸 醋酸钠 乙醇 乙醚
仪器、耗材 离心机 抽滤装置 精密pH 试纸或酸度计 电炉 烧杯 温度计
实验步骤
1. 将100 ml牛乳放到500 ml烧杯中,加热到40 ℃,在搅拌下慢慢地加入预热到40 ℃、pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液100 ml。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬乳液冷却至室温,离心(3000 r/min)10 min,弃去上清液,或4层纱布过滤,得酪蛋白粗制品。
2. 用少量水洗沉淀3次,离心(3000 r/min)10 min,弃去上清液。
3. 在沉淀中加入30 ml乙醇,搅拌片刻,将全部悬乳液转移至布氏漏斗中抽滤,用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次,最后用乙醚洗沉淀2次,抽干。
4. 取出沉淀,摊开在表面皿上去除乙醚,干燥后得酪蛋白纯品。称重量,计算百分含量。
其他
1 . 为什么酪蛋白可在等电点pH 下沉淀下来?
2 . 为什么可以用有机溶剂洗涤蛋白质沉淀?
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