基本方案
| 实验方法原理 | 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。 |
|---|---|
| 实验材料 | 新鲜培养的酵母细胞 |
| 试剂、试剂盒 | 裂解缓冲液（RIPA缓冲液） PBS |
| 仪器、耗材 | 预冷的玻璃珠 |
| 实验步骤 |
①在微型离心机上离心3mm，以收集细胞。 ②去上清，用PBS重悬细胞，再离心3min。 ③去上清，估算细胞沉淀的体积，向细胞沉淀中加人3倍体积的冰浴裂解缓冲 液，悬浮后置于冰上。 ④加入等体积的预冷玻璃珠。 ⑤剧烈振荡悬浮液30s。 ⑥重复步骤⑤，并在相差显微镜下观察，直到大部分酵母细胞被裂解。 ⑦4℃条件下在小型离心机中离心悬浮液5min， ⑧小心地倒出上清，并转移到另一管中，置于冰上备用。
展开 |
| 注意事项 |
器材预处理：将玻璃珠在1mol/L的HCl中洗两遍，然后在裂解缓冲液中洗两遍。将洗过的玻璃珠液泡于4℃条件下储存在少量的裂解缓冲液中。 |
近日，华南农业大学教授王应祥团队在国家自然科学基金等项目的资助下，研究揭示了模式植物拟南芥泛素连接酶后期促进复合物/细胞周期体（APC/C）调控减数分裂染色体正确分离的分子机制。该研究丰富了蛋白质泛素......
华东理工大学化学与分子工程学院、费林加诺贝尔奖科学家联合研究中心教授郭志前团队，创制了激活型化学遗传学荧光探针，首次在活细胞中监测蛋白质成簇/解聚的精确状态。相关研究近日作为VIP（VeryImpor......
日本名古屋大学研究团队在最新一期《自然·生物技术》杂志上发表了一项名为“内部帽启动翻译”（ICIT）机制的创新研究。该机制下的仿佛戴着帽子的mRNA可产生200倍以上的蛋白质，为治疗癌症和蛋白质合成异......
中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心/上海脑科学与类脑研究中心研究员刘真、孙怡迪，博士后朱文成团队，与复旦大学附属中山医院生殖医学中心主治医师木良善团队、上海交通大学医学院研究员李辰团队合作，描绘了......
图FUSEP化学生物学技术用于系统研究赖氨酸和非赖氨酸泛素化的位点信息在国家自然科学基金项目（22137004、22307062）资助下，清华大学药学院尹航教授团队在蛋白质泛素化研究领域取得新进展，开......
当前人工智能技术和产业有哪些热点？我国人工智能产业发展呈现怎样的特点？12月12日举行的中国科学院人工智能产学研创新联盟2024年会，为这些问题提供了答案。本次年会以“人工智能助力科研范式变革（AIf......
受大自然启发，美国西北大学生物工程师团队开发出一种植入皮下的传感器，可实时跟踪活体动物蛋白质水平的波动，测量炎症标志物的变化。相关论文发表在《科学》杂志上，标志着医学检测领域的一个重要里程碑。为了检测......
北京时间10月23日，在德国德雷斯顿举行的2024HUPO大会颁奖典礼上，备受瞩目的“ClinicalandTranslationalProteomicsAward”（临床转化蛋白质组学奖）荣耀加冕于......
在今年诺贝尔化学奖表彰计算蛋白质设计领域的重大进展后，美国能源部阿贡国家实验室团队宣布开发出一种名为MProt-DPO的创新计算框架，该框架利用人工智能（AI）和世界顶尖的超级计算机，推动蛋白质设计取......
人工智能（AI）蛋白质设计正在走向“更快、更好、更强”。美国麻省总医院布莱根分院和贝斯以色列女执事医疗中心团队开发了一款名为EVOLVEpro的AI工具，被认为是蛋白质工程领域的一项重大突破。团队在最......