酵母菌DNA制备

实验材料 酵母

试剂、试剂盒 YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB

仪器、耗材 玻璃珠试管摇床培养箱离心机

实验步骤

1.  注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。

2.  将1.5 ml 的过夜培养物转移到微量离心管中，室温高速离心5 s，倒掉上清，快速振荡分散沉淀物。
 
3.  细胞用200 μl 破菌缓冲液重悬，加0.3 g 玻璃珠（约200 μl 体积）及200 μl 酚/氯仿/异戊醇，在漩涡混合器上高速振荡2 min，室温高速离心5 min。

4.  取1~2 μl 水相转化感受态大肠杆菌只HB101或MH1，涂布在带有合适的抗生素的LB平板上以质粒上的抗药性标志进行选择。