酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法

酵母菌落PCR方法

1．在冰上配制反应混合液：

2μl                  10×菌落PCR缓冲液

1.2μl                 25mmol/L MgCl₂

0.4μl                 10mmol/L dNTPs

10pmol                引物（每一种引物）

0.2μl                 Taq DNA聚合酶（5U）

加水到总体积为20μl

2．用移液器加微量细胞（约0.25μl）到PCR反应混合液中（20μl反应体积）

3．PCR循环参数：

94℃          4分钟

94℃          1分钟

55℃          1分钟

72℃          2分钟

35个循环

72℃          10分钟

4．上全部样品进行琼脂糖电泳。