酶与抗体的偶联实验

实验材料 抗体

试剂、试剂盒 磷酸钠HRPO碳酸盐缓冲液过碘酸钠SASTrisEDTABSA甘油

仪器、耗材 透析膜离心机

实验步骤

1.  浓度≥1 mg/ml 抗体溶液对2 l 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液透析，于4℃缓慢摇动下过夜。

2.  10 mg HRPO溶解于1 ml 0.1 mol/l pH9.2的碳酸盐缓冲液，取0.25 ml 加入0.25 ml 新配制的NaIO4溶液中，盖紧混匀，于室温下避光放置2 h。

3.  取透析后的抗体溶液1 ml。加至得自步骤2的全部混合液中，置入装有玻璃棉的巴斯德吸管中，将管尖用Parafilm封口膜封好。加0.25 g Sephadex G-25 室温下避光放置3 h。

4.  柱子用0.75 ml 碳酸盐缓冲液流洗，以洗脱偶联物。加38 μl 新配制的NaBH4溶液至洗脱物中，室温于避光放置30 min。

5.  加112 μl 新配制的NaBH4溶液避光放置60 min，加0.9 ml 饱和硫酸铵（SAS）。溶液于4℃下温和振摇30 min。

6.  于4℃，10 000 g 离心15 min，弃上清。沉淀重悬于0.75 ml TEN缓冲液中，装入透析袋中于4℃下对2 l TEN缓冲液透析过夜。换TEN缓冲液再继续透析4 h。

7.  从透析袋中取出偶联物，加BSA至20 mg/ml。加等体积甘油，于-20℃保存。