酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（三）

在本次实验中，ZsGreen和DsRed细胞系在底读模式都有着相似的检测限，而且两者都比AcGFP细胞系的检测下限低3到4倍。本次实验一共重复了三次，但是DsRed实验结果并不是每次都能表现的足够好。在一次实验中，它的检测下限近似于AcGFP，但是在另一次实验中，它的检测下限又会很高。我们将这些区别归结于不同细胞系的通道数目不同。(伴随着一个成功的通道，细胞就会变得越暗)DsRed细胞系在实验开始阶段比其它细胞系长得快，所以在第一次实验中，它比其它细胞系多2-4倍的通道，结果就显然不够理想。

对于AcGFP和ZsGreen细胞系，当采用顶读时，检测下限升高将近三倍。另一方面，对于DsRed，当采用顶读时，检测下限会升高将近10-20倍。我们认为造成这种灵敏度下降的原因在于DMEM培养基有红色荧光信号，会对结果有内部干扰。事实也证明，将培养基换成无色的HBSS，相应的DsRed的顶读结果也会变好。列表3展示了将有色培养基换成无色培养基的结果。底读并没有太多改变(尽管AcGFP的检测下限看起来改善了)，证明这种操作方法并没有导致细胞的损失。然而顶读结果却让灵敏度改善了将近三倍。这些结果也从某一方面支持了一种理论，那就是有色培养基会一定程度上影响顶读的灵敏度。

细胞混合结果

在本次实验中，我们在一个96孔板里混合了多种细胞，保证每个孔大约50,000个细胞。因此，如果是1:1混合，那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合，那么每种细胞将有1 6 , 7 0 0 个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(DsRed设置)的激发和发射来检测。观察到的RFU值与预测值接近。结果总结如下。结果显示，AsGF P和ZsGreen可以和DsRed一起检测，反之亦然。(见图表4)

结论

Molecular Devices公司的荧光读板仪可以检测完整贴壁细胞中的荧光蛋白。波长扫描可调的功能可以优化每一种独特荧光染料的波长结果。底读模式提供最佳检测灵敏度，顶读模式也可以提供可利用的数据，尤其是对含有ZsGreen和DsRed的细胞系。顶读模式检测DsRed细胞系时，可以通过替换无色培养基来达到优化实验结果的目的。