酶标仪双波长与单波长比色测定HBsAg的比较

　　使用酶标仪对e抗进行检测，在选择双、单波长使用方面进行研究分析，供大家参考。当使用酶标仪判定HBsAg的结果时，我们会相应地发现用单波长比色测定会促进部分弱阳性样品漏检，而采用双波长比色测定则可进一步减少相应现象的发生。 
　　资料与方法 hBsAg试剂盒为上海某公司。 dRG-3000型酶标仪，美国某公司产。 
　　将HBsAg阳性对照血清倍比稀释1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64后进行测定。 
　　标本：257例患者血清。 
　　方法：稀释样品100μL加入反应孔，37℃25min，洗孔后加酶结合物100μL，37℃25min，洗孔后加显色剂100μL，37℃10min，加终止液50μL终止反应，单波长用450nm滤色片，双波长用450nm为主波长，630nm为副波长，实验同时设阴、阳性对照。样品吸光度（A）/CO≥2.1判定为阳性（按说明书规定，CO=4.0×阴性对照吸光度值，若阴性对照吸光度<0.05则以0.05计算）。 
　　结果 
　　倍比稀释的阳性对照血清测定结果，单波长法A值2.846，2.437，1.806，1.580，1.438，0.350（CO 1.068），即仅1：2、1：4阳性。双波长法A值2.641，2.528，2.475，2.286，2.262，2.188（CO1.002）即1：2、1：4、1：8、1：16均阳性。 
　　257例患者血清测定两法结果一致的252例，5例不同的结果单波长法A值1.978，1.877，1.604，1.354，1.022，全阴性；双波长法A值2.248，22.215，2.284，2.209，2.256，全阳性。1个月后再次检测该5例患者HBsAg，结果仍为阳性。 
　　单波长法测定易受显色剂空白吸光度、血清浊度、反应孔划痕等因素的影响，因此吸光度较高，而双波长法可有效避免上述影响因素，减少了干扰，提高了HBsAg弱阳性样品的检出率。因此我们建议在使用酶标仪判定HBsAg结果时应尽可能使用双波长比色法，以保证结果的可靠性。 
　　讨论 
　　因为至今仍然没有一种链球菌抗原使人体感染后，可以使抗原体100%地引起反应，在国外的大多文献中主张在1个实验中同时检测2种以上的链球菌抗体。而针对急性的风湿热，或者是拥有急性肾炎的患者，ASO水平偏低或者处于不稳定的临界值时，ADNaseB抗体在大多数情况下会出现升高的可能，所以可以做除ASO之外的关于第2种抗体进行相关的测定。 
　　链球菌抗体的水平不仅会受到季节和地理位置影响，还受年龄的影响。所以，实验室的位置特殊会影响数值，最后可以在同一地区为不同年龄的患者做测定，以免出现误诊。根据本实验测定，结果表明，链球菌的2种抗原体，即ADNaseB与ASO的水平会在成年人与学龄前儿童中显示较低，而对于学龄期则是较高，这一测定国内外是显示一致的。 
　　酶标仪在测定双波长和单波长过程中，其相应的自动化分析仪以及模式是十分相似的。但是，这两者的吸光度测定在一定程度上有很大不同。而通常情况下，其相应的生化分析是属于水平光路形成的，但是酶标仪检测的是垂直光路。这两者之间的测定原理是完全一样的，这两者都完全使用的是朗博-比尔定律，均是测定样本的吸光度，但针对垂直光的特点来说，其标本的吸光度被液体浓缩或者稀释的影响特别小，但是酶标板的透光性和样本的液面是否保持一致和孔底是否保持平整等等的影响却是非常大的。 
　　在进行使用单波长测定酶标仪进行吸光度的时候，排除被测定内源性等因素以外的干扰外，相应液体表面所展现的张力对其的影响是巨大的。而在整个检测中，由于相应的液体表面张力起到相关作用，在液体表面并不是相对平整的平面，其是一个凹凸不平的凹面，在侧面观察看起来像一个凹透镜，而在这种情况下就会不可避免地影响光路顺畅地经过。而因为受到来自于凹液面的影响，当光线在通过液面的时候，除掉被液体正常吸收的一部分外，还有一部分是被直接反射以及折射过来的，就像光线透过凹透镜那样，促使吸光度的监测受到直接影响。并且酶标仪主要采用的是点光源，其点光源通过光导纤维传播，如果每次都进行相同的检测，就会保证吸光度的重复性，可是利用内机械运动等多种因素所引起的误差，是不可能保证所有孔都被检测到。因此，使孔和孔之间存在一些明显差异。整块板的单波长的CV检测值3%以上，吸光度最低值和最高值的误差达到12%12以上。 
　　然而，针对双波长的检测，其是为了减少电路干扰以及测定干扰，所以，测定结果会得到十分明显的改善，整块样板的CV值<2%。在对稳性观察时，这两次的检测结果均呈现出相应的一致性，而这项检测表明ST-360稳定性会好很多。不仅如此，经过相关资料我们知道，有关上海某公司所产生的直接WellscanMK2与ST-360测定结果是完全相同的，而两者在进行检测的性能上基本一致。但是，其相应的内液体的表面张力是不同的，会促进单波长在测定过程中直接产生较大的误差。而且，对于不同的洗涤剂将影响终止液和最后加入的底物液面基本情况是有区别。但是，其表面活性剂逐渐加入到洗涤剂清洗后，相关液面形成的更凹，其单波长所受到的影响也相对较大，同时表明抗原活性剂以及其的浓度形成正比关系。然后，在使用中性蒸馏水进行洗涤后，双、单波长的技术检测的结果是一样的。