酶联免疫吸附实验—直接细胞ELISA法检测细胞表面抗原

直 接 细 胞 ELISA 法检测细胞表面抗原
在测定单一细胞群体的抗原表达水平时，该 检 测 过 程（图 1.1. 5 ) 与流式细胞分析一 样 灵 敏（单 元 4.1、单 元 4. 2)。但在检测混合细胞时，敏感性不及流式细胞分析。用生物素化的抗体替代酶标抗体，就可转化为间接方法，而后加入亲和素标记的碱性磷酸酶再次孵育可增加敏感性。

附 加 材 料（其他材料见基本方案1)

细胞样品

碱性磷酸酶标记的特异性抗体

冰冷的洗涤缓冲液

2 5 % (m/V) 戊 二 醛（EM 级 ； Sigma) ，可选用PBSLE: PBS (附录 1)，力口 l 〇 0 mmol/L 赖 氣 酸 或 100 mmol/L 乙醇胺，可选用锥底或圆底微量滴定板

1.使用不同数量的阳性和阴性对照细胞样品和不同浓度碱性磷酸酶标记抗体，十字交叉连续稀释分析法确定每孔添加的最适细胞数和酶标抗体最适浓度（见辅助方案）。