醋酸纤维素膜电泳分离鉴定蛋白质实验

血清蛋白质 蛋白质样品

巴比妥 蒸馏水 HCl 氨基黑 磺基水杨酸 冰醋酸 醋酸 无水乙醇

电泳仪 电泳槽 培养皿 血色素吸管 铅笔 尺 玻片 滤纸 镊子

1.  膜的准备: 将醋酸纤维素膜切成8 cm×2 cm 条块( 或根据需要决定薄膜大小) , 在薄膜一端1 . 5 cm 处用铅笔轻轻画一条线( 点样处) , 浸入巴比妥缓冲液中至完全浸湿( 大概20 min 左右)。用镊子取出浸透的薄膜, 夹在两层滤纸中间, 轻轻按压,吸去多余的液体。

2.  点样: 用较尖的血色素吸管或其他点样管吸取样品2～3 μl 涂在玻片的一端截面上(玻片宽度应小于膜宽度) , 然后将沾有样品的玻片截面与膜点样处轻轻接触, 样品即呈一条线“印” 在膜上, 使样品尽量点得细窄而均匀。

3.  电泳: 已点好样品的薄膜架在铺有滤纸桥的电泳槽上,使点样端靠近阴极, 膜用镊子轻轻拉平不能贴在槽底。盖好槽盖, 通电, 控制电流强度为0 . 7 ～ 0 . 8 mA/ cm 膜宽, 当白蛋白(仔细观察可见淡黄色) 移动约3 cm 即可切断电源停止电泳, 一般为40～60 min。

4.  染色和漂洗: 取下膜, 立即浸入染色液中10 min。取出移入2 . 5%醋酸中漂洗脱色, 每隔5 min 换一次漂洗液, 直至膜背景无色为止( 约更换3 次) , 即可观察到清晰的电泳图谱。

5.  透明处理: 待漂洗干净的电泳图谱完全干燥后( 可用电吹风机吹干) , 浸入透明液中0 . 5 min 后, 立即取出, 平贴在玻璃板上, 完全干燥后即成为透明的薄膜图谱, 可作扫描或照相。如将该玻板浸入水中, 则膜脱下, 吸干水分, 可长期保存。