金属硫蛋白的测定实验

牛血红蛋白

氯化镉 Tris-HCl 蔗糖

分光光度计 离心机

一、实验步骤

1.  组织按1:4（w/v）加入0.25 mol/l 蔗糖溶液，制备匀浆，18 000 g离心20 min（4℃）。

2.  取上清液0.5 ml，加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl缓冲液（pH8.0）。

3.  再加入1 ml CdCl2（10ppm）混匀，室温孵育5 min。

4.  加入2%牛血红蛋白0.2 ml，沸水浴1 min，室温离心1 000 g，5 min。

5.  反复加入牛血红蛋白，加热、离心3次。

6.  在原子吸收分光光度计，用石墨法测定上清液Cd含量。

7.  组织MT含量按6 g原子Cd结合可分子MT计算。

8.  按Bradford 法测定上清液中的蛋白质含量。