所谓纯化,也就是MT粗品(60%~90%)、MT精品(≥90%)以及纯品(≥95%)的形成过程。由报道的资料看,纯化方法大概是一致的,首先是根据MT-1和MT-2所带电荷不同的性质,进行离子交换将MT-1和MT-2分开,然后将收集MT-1和MT-2的层析液分别进行脱盐,最后收集冻干、保存。
取匀浆液直接上Sephadex G-50柱(4.5×100cm)进行分离,以0.01mol/LTris-HCl,pH8.6缓冲液洗脱。收集含MT组分层析液,再上预先用0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6缓冲液平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow(3×70cm)柱进行离子交换层析,以Tris缓冲液进行直线梯度洗脱(A液:0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6;B液:0.25mol/L Tris-HCl,pH8.6)。分别收集含MT-1和MT-2组分,冷冻干燥浓缩成体积15~20mL,再分别上预先用0.01mol/L碳酸铵平衡好的Sephadex G-25柱(1.6×120cm)进行脱盐。所得MT-1和MT-2冷冻干燥后保存于-20℃冰箱中。
虽然文献中讲到许多分离纯化方法,但是多为实验室研究,真正运用到实际生产的并不多,这主要与实际生产中的各种环境因素的影响有关。在实验中发现,诱导后家兔肝脏中MT的含量愈高,实际生产中MT的提取率就愈大,相反,MT的提取率就愈低。