银染(silverstaining)操作规程

实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。

试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛

实验操作程序：
固定：30min或者更长时间
100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇 30% 乙醇
17g 乙酸钠 28.2g 三水乙酸钠
0.5g硫代硫酸钠
加水到终体积250ml
水洗：3 x 10min
银染：20min
0.625g AgNO3
100 ul 37% 甲醛
加水到终体积250ml
水洗： 2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
显色：视情况而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛
加水到终体积250ml

终止：10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到终体积250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事项：
1．固定时间较长，则加一步水洗 30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
4． 显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。