对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的绿原酸对照品6mg,置2ml量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得(每1ml中含绿原酸3mg)。
标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液20、40、60、80、100μl,照薄层色谱法(中国药典1990年版一部附录57页)试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上使成条状,以醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,分别刮取绿原酸条斑,同时刮取同一块薄层板上与绿原酸条斑等面积的硅胶G作为空白,分别置具塞试管中,各精密加入盐酸溶液(0.2mol/L)10ml,充分振摇,静置30分钟,移至10ml离心管中,离心,取各上清液,照分光光度法(中国药典1990年版一部附录51页),在324nm波长处测定吸收度,求出回归方程。
供试品溶液的制备
取本品20片,除去糖衣,研细,取粉末约1.2g[同时另取粉末测定水分(中国药典1990年版一部附录30页一法)], 精密称定,用石油醚(60~90℃)作溶剂,置水浴上加热回流提取4次(30、30、20、20ml),每次20分钟,弃去石油醚,残渣挥尽石油醚,用乙醇作溶剂,置水浴上加热回流提取4次(30、30、20、20ml),每次20分钟, 合并乙醇溶液,滤过,回收乙醇,残渣用水10ml分数次洗涤,移至分液漏斗中,用氯仿振摇提取3次(30、20、20ml),弃去氯仿溶液,加10%枸橼酸溶液调pH值至小于3,用醋酸乙酯振摇提取6次(30、20、20、10、10、10ml),合并醋酸乙酯溶液,用适量无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣用无水乙醇分数次洗涤,移入2ml量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得。
测定法
照薄层色谱法(中国药典1990年版一部附录57页)试验,精密吸取供试品溶液60μl,点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上使成条状。另取对照品溶液5μl,点于供试品条斑一侧,作为对照。以醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)为展开剂,展开,取出,晾干,立即置紫外光灯(365nm)下检视,将与对照品斑点相应位置上的供试品条斑刮入具塞试管中,同时刮取同一薄层板上与供试品条斑等面积的空白硅胶G,置另一具塞试管中,作为空白,分别精密加入盐酸溶液(0.2mol/L)10ml,充分振摇,静置30分钟,移至10ml离心管中,离心,取上清液,照分光光度法(中国药典1990年版一部附录51页),在324nm波长处测定吸收度,从回归方程中求出供试品溶液中绿原酸的重量,计算,即得。
本品按干燥品计算,每片含金银花以绿原酸(C16H18O9)计,不得少于1.26mg。