各位先生，各位女士，各位来宾，各位领导，各位海外侨胞，港澳同胞，
欢迎参加两位新人的结婚晚会
哦 啊 拿错了， 这是我明天参加婚礼的发言
这个才是
各位战友 我们来聊聊PCR ：）
PCR可以说是目前分子生物学实验中应用最为广泛的一种技术。从最初的在几个水浴锅里把试管放来放去，到现在各种先进的PCR仪， 到REAL TIME PCR。 设备是越来越先进，方法是越来越多，但基本的原理还是那套。然而实际操作中，仍然有很多的问题让人头疼。正好看到有人建议来个PCR讨论区，就信手来了这么一篇，希望能抛砖引玉 顺手牵羊 大海捞针 针锋相对 对对对 对不上来了.
PCR的原理： 别 别 别砸我，只是个标题，在这里写PCR原理实在是浪费大家时间
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(此处略去1000字)
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增加PCR的特异性：
1. primers design
这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件
a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量
b. GC% 40%~~~~60%
c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性
d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GC
e. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMER
f. 避免3'端的错配
g. 避免内部形成二级结构
h. 附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值时不需要加上这些序列,但在检测互补 和二级结构是要加上它们
i. 需要使用兼并引物时,