间充质干细胞的传代

实验概要

间充质干细胞的传代

主要试剂

DPBS、0.05%的Trypsin、间充质干细胞培养液

主要设备

15 mL离心管、培养皿、离心机、培养箱、倒置显微镜

实验步骤

（1）37℃预热间充质干细胞培养液和0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶。
（2）弃掉旧培养液，加入室温放置的DPBS洗一遍，尽可能将残留的培养液洗净，吸去DPBS。
（3）加入适量（盖住皿底即可）0.05%胰蛋白酶，37℃培养箱内孵育消化2～3 min。
（4）倒置显微镜下观察细胞变圆、漂起，可加等量间充质干细胞培养液终止消化。
（5）轻柔吹打细胞，收集细胞悬液到15 mL离心管中，室温1000 r/min离心3 min，弃上清。
（6）加入新鲜间充质干细胞培养液重悬细胞，轻柔吹打均匀，视细胞量按每10 cm培养皿1×10⁶个细胞的密度接种到新皿中。
（7）放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中培养。