间充质干细胞的冻存

实验概要

间充质干细胞的冻存

主要试剂

DPBS、0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶、间充质干细胞培养液、冻存液

主要设备

培养皿、15 mL离心管、冻存管、程序降温盒

实验步骤

（1）37℃预热间充质干细胞培养液和0.05%胰蛋白酶，4℃预冷冻存液。
（2）同间充质干细胞传代第（2）～（5）步。
         （2）弃掉旧培养液，加入室温放置的DPBS洗一遍，尽可能将残留的培养液洗净，吸去DPBS。
          （3）加入适量（盖住皿底即可）0.05%胰蛋白酶，37℃培养箱内孵育消化2～3 min。
           （4）倒置显微镜下观察细胞变圆、漂起，可加等量间充质干细胞培养液终止消化。
             （5）轻柔吹打细胞，收集细胞悬液到15 mL离心管中，室温1000 r/min离心3 min，弃上清。
（3）加入4℃预冷的冻存液，吹打混匀。
（4）分装入事先写好细胞信息（细胞名称、代次、细胞量、冻存人、冻存日期等）的冻存管。