雌激素检测试剂盒依靠ES单克隆抗体来识别E1,E2,E3。 样品中的ES和一个E2-酶结合物预先混合然后加入到每个微孔中竞争与包被在微孔表面的特异性抗体。
样品中ES的浓度如果高于E2-酶结合物，ES将主要与抗体结合。反之样品中ES的浓度如果低于于E2
-酶结合物，E2 -酶结合物将主要与抗体结合。通过洗涤步骤去除没有反应的ES和过量的E2-酶结合物。
和微孔板中抗体结合的E2 -酶结合物催化底物发生反应产生有色物质。 通过一个孵育期用稀酸终止反应。
样品中ES的浓度越高导致结合到微孔板抗体上的E2-酶结合物越少，从而产生的颜色越淡，吸光度越低。