霉菌的形态观察实验原理和操作步骤

一、实验目的
1、学习自制水浸片观察微生物的形态；
2、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，了解四类常见霉菌的基本形态特征。
二、基本原理
霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

三、实验器材
1、菌种
青霉(Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.）培养约2～5d的马铃薯琼脂培养物。
2、溶液或试剂
乳酸石炭酸棉蓝染色液、蒸馏水、50%乙醇、碘液。
3、器材
剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜等。
四、实验方法及步骤
1.水浸制片观察法
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片），先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。
2.玻璃纸透析培养观察法
（1）玻璃纸的选择与处理
要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。也可收集商品包装用的玻璃纸，加水煮沸，然后用冷水冲洗。经此处理后的玻璃纸若变硬，必定是不可用的，只有那些软的可用。将那些可用的玻璃纸剪成适当大小，用水浸湿后，夹于旧报纸中，然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。
（2）菌种的培养
按无菌操作法，倒平板，冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上，再用接种环沾取少许霉菌孢子，在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。然后将平板置28— 30℃下培养3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落（根霉菌的气生性强，形成的菌落铺满整个平板）。
（3）制片与观察
剪取玻璃纸透析法培养3—4天后长有菌丝和孢子的玻璃纸一小块，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脱落下来的孢子，并赶走菌体上的气泡，然后正面向上贴附于干净载玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉蓝液，小心地盖上盖玻片（注意不要产生气泡），且不要移动盖玻片，以免搞乱菌丝。
标本片制好后，先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。
五 注意事项
1、制片时，应该挑取少量带有孢子的菌丝，取的多，反而不宜观察。
2、标本制好后，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。