反向遗传学是一种不可或缺的工具,它彻底改变了我们对病毒发病机制和疫苗开发的认识。大型RNA病毒基因组,如冠状病毒基因组,在大肠杆菌宿主中克隆和操作都很麻烦,因为它们体积庞大,而且有时不稳定。因此,为RNA病毒提供另一种快速、适用的反向遗传学平台将有利于研究人员加快相关研究。
近日来自瑞士伯尔尼大学和病毒与免疫学研究所等机构的研究人员合作在预印本网站bioRixv展示了一项未经同行评议的最新研究,该研究展示了一个基于酵母的合成基因组学平台的完整功能,用于包括冠状病毒科、黄病毒科和副粘病毒科的成员在内的多种RNA病毒的遗传重建。
图片来源:bioRxiv
病毒亚基因组片段是使用病毒分离物、克隆病毒DNA、临床样本或合成DNA产生的,并在酿酒酵母中使用转换相关重组(TAR)克隆一步重新组装,以维持基因组作为酵母人工染色体(YAC)。T7-RNA聚合酶被用来产生感染性RNA,然后被用来拯救活病毒。
基于这个平台,研究人员已经能够在收到合成的DNA片段后的一周内,对最近流行的SARS-CoV-24的化学合成克隆进行工程设计和再生。
研究人员在这里描述的技术进步使我们能够对新出现的病毒作出迅速反应,因为它能够在暴发期间实时地生成和描述进化的RNA病毒变体的功能。
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