骨髓基质细胞固紫B盐染色法

　有研究表明，骨髓基质细胞（BMSC）在调控造血、组织修复及一些疑难疾病的治疗中具有重要意义。然而BMSC并不具备典型形态特征，且骨髓涂片中数量甚少，传统的wright-Giemsa法染色后于普通光镜下不易识别。应用单克隆抗体技术结合流式细胞仪、免疫细胞化学染色、荧光标记技术等可将其鉴别，但亦各有其局限性。

　　为此，龚旭波等人^[1]建立了将固紫B盐应用于BMSC的特异性细胞化学染色方法。该方法简便快速，整个操作过程仅需30 min，染色明显，对陈旧标本也易着色，染色液配置后可较长时间保存，染色结果保留数月也不褪色，表明固紫B盐对BMSC染色具有较高的稳定性、特异性。

◆实验步骤

1．标本采集

　　吸取患者骨髓、胸腔积液或腹腔积液50 μL制成涂片。

2．溶液配制

　　固定液：95％乙醇溶液34.5 mL，40％甲醛溶液5.5 mL，蒸馏水1 mL混合而成；

　　1 g/L固紫B盐PBS溶液：50 mg固紫B盐粉末溶于50 mL PBS溶液，pH 7.2~7.6，4℃下保存；

　　苏木精复染液：苏木精2 g溶于250 mL无水乙醇中，硫酸铝10 g溶于750 mL蒸馏水中，两种溶液混合后加热煮沸2 min，再加入0.5 g碘酸钠和1 g柠檬酸，混匀。

3．固紫B盐染色

　　上述新鲜干燥标本于固定液固定30 s，小水流冲洗后晾干，置入1 g/L固紫B盐PBS溶液（pH 7.2~7.6），37℃水浴箱内置30 min，流水冲洗1 min，晾干后苏木精复染2 min，流水冲洗，待干。镜下观察细胞的着色·情况及阳性BMSC形态特征。