骨髓间充质干细胞基因工程改造方法的比较

摘要 目的: 对脂质体介导、反转录病毒载体介导、腺相关病毒载体介导这3 种常用的基因转染方法进行比较, 寻找一种适合于骨髓间充质干细胞的基因转移方法。方法: 实验于2004- 10/2005- 06 在首都医科大学北京神经科学研究所完成。①在脂质体介导下, 将增强的绿色荧光蛋白基因导入骨髓间充质干细胞, 然后通过G418 抗性筛选, 观察转染效率。② 反转录病毒介导的基因转染, 首先利用LipofectAMINETM 2000 转染包装细胞系PT67, 获得重组反转录病毒上清, 然后用病毒上清直接感染骨髓间充质干细胞。转染后的细胞同样用G418 筛选, 得到阳性克隆后进行定点消化、扩增。③在腺相关病毒介导的基因转染过程中, 首先通过磷酸钙沉淀法转染包装细胞系HEK293, 得到重组AAV-LacZ 病毒颗粒直接感染骨髓间充质干细胞, 1 周后进行β-gal 染色, 计算转染效率。