冲柱时间的长短,要看你的色谱柱。柱长决定流动相的缓冲时间。按照标准执行,需要冲10倍的柱体积。不过如果是研发做实验,通常会节省一些时间。250mm的长柱都是至少要冲色谱柱半个小时也就够了。反相色谱柱,比如C8和C18色谱柱会先用10%的甲醇水(或乙腈水)来过渡半小时,然后冲缓冲盐的流动相平衡进样。结束后用10%的甲醇水(或乙腈水)过渡半小时,然后用纯甲醇(或纯乙腈)保存色谱柱半小时。这样做的主要原因是,流动相中的缓冲盐不可以直接遭遇纯有机相。因为溶解度等原因,可能会出现盐析现象。所以会用甲醇水做过渡。你在冲流动相的时候可以观察基线,平衡后就可以进样分析。但是冲洗色谱柱的时候和基线没有关系。冲洗色谱柱主要是洗去色谱柱中残留的流动相和样品,避免他们对固定相,也就是你色谱柱的填料产生影响。
使用缓冲液要注意几点1:避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2:缓冲液最好要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3:实验后不可用有机溶剂直接过度,有机......
在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH值,缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响。1)柱压升高;原因:缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出,堵塞塞......
2)当反相使用高浓度缓冲盐时,注意过渡 在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时,一定要注意应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出......
新的色谱柱柱活化冲洗技巧方法/步骤新的色谱柱活化:采用100%甲醇1ml/min冲洗60min,再换成流动相进行平衡;如果流动相中含有缓冲盐,在换成流动相前,请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡;日常......
色谱分析过程中,缓冲液是不可或缺的,因为要用它来调节流动相的pH值,缓冲盐使用不当,后果可是吃不了兜着走。比如说,色谱柱压升高、柱效下降、保留时间异常等等不良影响:1)柱压升高;原因:缓冲盐使用不当导......
不得不说,HPLC对于特定待分析物的方法建立在一定程度上是带有盲目性的,缓冲盐等的选择更是如此。这篇文章综合了近年来研究得出的缓冲盐、离子对......