高效液相色谱条件筛选过程应该遵循的原则

　　色谱定量分析是根据组分检测响应讯号的大小，定量确定试样中各个组分的相对含量。其依据是：每个组分的量(重量或体积)与色谱检测器产生的检测响应值(峰高或峰面积)成正比。具体到特定方法，主要有下列方法：

　　1.归一化法

　　当样品中所有组分能全部流出色谱柱，并在检测器上都能产生相应信号（得到色谱峰）时，常采用归一化法。

　　Ci = mi/m×100％ = fi•Ai /Σ fi•Ai ×100％

　　* 优点：简单方便， 不受进样量及操作条件波动的影响

　　* 缺点：所有组分都必须出峰， 每个组分都必须有校正因子

　　2.外标法（又称标准曲线法）

　　配制已知浓度的标准样品进行色谱分析，测量各组分的峰面积或峰高，作峰面积(或峰高)和浓度的标准曲线，然后在与标准样品分析相同操作条件下，进入相同量(一般为体积)的未知样品，测得被分析组分的峰面积（或峰高），在标准曲线上即可查得相应的浓度。

　　在工厂的日常控制分析中大多数采用这种方法，分析结果的准确性主要取决于进样量的重复性和操作条件的稳定性。

　　Ci = mi/m×100％ = fiAi/m×100％

　　* 校正：标准曲线、两点法、单点法

　　* 优点：简便、无需所有组分都出峰（校正因子），经常用于几个组分的分析

　　* 缺点：操作条件波动的影响较大,进样量影响大

　　3.内标法

　　由于吸附或化学反应等原因，色谱柱不能使所有的组分都流出来，或者各组分都能流出，但检测器不能对所有组分都给出相应的色谱峰，或者有的样品含量过大（得不到完整的峰），或者过小，或者只要求定量分析复杂样品中几个组分，均可采用内标法。

　　过程：在总量为m样品中如入质量为mS的内标物S，然后根据被测物和内标物的重量和在色谱图上相应的峰面积比求出某组分i,的含量

　　mi/ms = fiAi / fsAs

　　Ci = mi/m ×100％

　　= fiAi ms / fsAs m×100％

　　* 优点：不需所有组分都出峰（校正因子），操作条件和进样量基本无影响

　　* 缺点：内标物难找－－稳定无反应、结构性能，相似、保留时间内插并完全分离

　　* 注意：内标法比较适用于低含量组分的分析， 一般选作内标物的物质，最好在样品中不存在，其保留值在所有组分保留值的中间，加入内标物的含量和待测组分含量不应相差很大。

　　4.叠加法（内加法）

　　内加法适用于较特殊的情况：图谱上没有适当位置可插入内标峰，或因各种条件限制无合适的内标物时。

　　此时可先以样品出一张图，再在样品中加入一定量被测组分后再进样，看峰面积增加了多少，由此比例来求出原始含量。