高效液相色谱柱前衍生荧光检测法测定游离脂肪醇

高效液相色谱柱前衍生荧光检测法测定游离脂肪醇

摘要：本文利用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸（BCAA）作为柱前衍生试剂建立了测定游离脂肪醇的方法，实验以1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）环己碳二亚胺（EDAC）作为缩合剂，4-二甲氨基吡啶（DMAP）为催化剂，55℃下衍生反应25min后获得稳定的荧光产物。在EclipseXDB-C8色谱柱上，通过梯度洗脱对12种游离脂肪醇进行了分离和在线质谱定性。采用大气压化学电离源（APCI）正离子模式，对抗静电剂（十二烷基磷酸酯钾盐）中游离脂肪醇进行定性及相应含量测定。脂肪醇的线性回归系数大于0.9997，检测限在9.40-25.32fmol。关键词：高效液相色谱-质谱；荧光检测；柱前衍生；脂肪醇脂肪醇作为表面活性剂的主要原料已广泛应用于药物和化妆品行业，这类物质的检测仍然存在一定难度。目前高灵敏度测定脂肪醇的方法是利用荧光试剂对醇类化合物进行衍生[1]。用于衍生脂肪醇的荧光试剂有酰氯类试剂[2-4]，这类试剂在潮湿环境下不稳定，因而对衍生条件的要求比较高。羧酸类试剂[5,6]对水稳定，但需要有缩合剂的存在才能与醇发生衍生反应，目前有报道用1-异丙基-3-（3-二甲氨基丙基）-环己碳二亚胺（IDC）作缩合剂[7]，但是酯产率不高。本文利用一种新的羧酸类试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸作为柱前衍生试剂，用1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）环己碳二亚胺（EDAC）作为缩合剂,对C1-C12的脂肪醇实现了快速准确的柱前衍生和分离测定。此方法操作简便,衍生产物稳定，重现性好，灵敏度高。Agilent1100型高效液相色谱-质谱联用仪（Agilent公司）配备四元梯度泵，在线真空脱气机，荧光检测器，大气压化学电离源（APCI），EclipseXDB-C8色谱柱（4.6×150mm,5μm）。1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸（自制），12种脂肪醇标准样品（购自SIGMA公司），光谱纯乙腈（购自德国MERCK公司），1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）环己碳二亚胺（EDAC）（购自SIGMA公司），4－二甲氨基吡啶（DMAP）购自上海化学试剂公司，其他试剂均为分析纯，纯水由Milli-Q超纯水系统制备。