鸭源性核酸PCR荧光探针试剂盒Folin－酚试剂法操作分析

一、鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒Folin－酚试剂法
目前实验室较多用用Folin-酚法测定蛋白质含量，此法的特点是灵敏度高，较双缩脲高两个数量级，较紫外法略高，操作稍微麻烦，反应约在15分钟有zui大显色，并zui少可稳定几个小时，其不足之处是干扰因素较多，有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。
原 理
蛋白质中含有酚基的酪氨酸，可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物，颜色深浅与蛋白含量成正比。
鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒操 作
1、标准曲线的制备：
按下表操作，在试管中分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白标准溶液，用生理盐水补足到1ml。加入5ml的碱性酮试剂，混匀后室温放置20分钟后，再加入0.5ml酚试剂混匀。
编 号 1 2 3 4 5 6 蛋白标准（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 碱性酮试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 混匀后室温(25℃)放置20分钟 酚试剂（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分钟后，以第1管为空白，在650nm波长比色，读出吸光度，以各客的标准蛋白浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘出标准曲线。
2、血清蛋白质测定。
稀释血清（或其它蛋白样品浓度）：准确吸取0.1ml血清，置于50ml容量瓶中，用生理盐水释释至刻度（此为稀释500倍，其它蛋白样品酌情而定）。再取三只试管，分别标以1、2、3号，按下表操作：
编 号 测定管 标准管 空白管 稀释标本(ml) 0.2 — — 稀释标准液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 碱性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混匀后于室温放置20分钟 酚试剂(ml) 0.1 0.1 0.1
混匀各管，30分钟后，在波长650nm比色，读取吸光度。
鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒计 算
1、以测定管读数查找标准曲线求得血清蛋白含量。
2、无标准曲线时，可以与测定管同样操作的标准管按下式计算蛋白含量。