黄化豌豆幼苗的“三重反应”实验

实验方法原理：乙烯是一种气体激素，它对植物的代谢，生长和发育有着多方面的作用。用乙烯气体处理黄化的豌豆幼苗，可抑制幼苗上胚轴的伸长，并使上胚轴发生膨大及横向生长。黄化幼苗对乙烯的这三种反应被称为“三种反应”，并可作为对乙烯的一种诊断性鉴定方法。

这种方法是根据乙烯的主要生理作用建立的。据报导，乙烯可使细胞壁内表面在纵向方向沉积的微纤维增多，这样就限制了细胞的纵向延伸，加强了细胞的横向扩大，从而表现出上胚轴伸长受限制及横向膨大现象。横向生长是由于乙烯抑制了生长素从上胚轴靠上一边向靠下一边的侧向运输，使靠上一边比靠下一边有较多的生长素，因而生长较快所造成。这种上下生长的差别，被称为“偏上性”（epinasty）生长，是乙烯及其类似物（如乙炔，丙烯等）及可产生乙烯的物质（如生长素类物质）所特有的反应。该反应敏感（低浓度即有反应），发生迅速，成为最早被应用的一种乙烯生物鉴定法。

现代则多用气相色谱对乙烯进行定量测定，但有时需和生物测定配合应用。

实验材料：黄化豌豆幼苗    

试剂、试剂盒：乙烯气体  

仪器、耗材：

花盆                                                                 

蛭石                                                                  

架子                                                                  

黑布罩                                                                  

玻璃试管                                                                 

加橡皮塞                                                                  

滤纸 

实验步骤：

一、材料和方法

第一阶段：黄化豌豆幼苗的培育

仪器设备

花盆，蛭石，架子，黑布罩，玻璃试管直径约4cm ，长约20cm ，加橡皮塞，每组10个，滤纸，乙烯气体或乙烯利溶液10^－1，10^－2，10^－3，10^－4 M，注射器，量筒100 MM ³，10 MM ³，暗柜

二、实验步骤

1．将精选的豌豆种子放在过饱和漂白粉溶液中浸泡15分钟，放在干净的纱布袋中，在流动的自来水中吸涨一天。

2．将种子播在放有蛭石的花盆中，放在25℃，黑暗条件下生长。

3．在黄化豌豆幼苗生长到约4cm 时（约一周）可用做试验。

4．先用水充满试管，再将水倒于量筒中以测量试管的实际体积；

5．将试管洗净，用少量酒精洗涤，在试管底部作一滤纸桥；

滤纸桥做法：将滤纸剪成宽约1.2cm ，长约10cm 的长条，在滤纸中部挖一小洞，洞的大小可允许豌豆苗穿过即可，将滤纸叠成三折放入试管。

6．将豌豆幼苗从滤纸洞中插入，使根部泡于水中，然后将试管用橡皮塞塞紧；

7．根据测得的试管体积计算，用注射器注入相应的乙烯气体，使在试管内的乙烯气体浓度分别为0，0.5，1.5，10pp M 。

以上步骤6－7要尽可能在完全光下进行。

8．将一组试管（不同浓度的处理）放在25℃黑暗条件下2天；另一组放在光照条件下（200－500尺烛光）2天后进行观察记载。

二，观察和记载

1．测量并记载上述不同浓度乙烯处理的幼苗长度，以浓度为横坐标，长度为纵坐标绘图；

2．绘图表示不同浓度的乙烯处理对黄化豌豆幼苗形态的效应。